产品货号：
SNM114
中文名称：
胰蛋白酶测定试剂盒(紫外比色法)
英文名称：
Trypsin assay kit
产品规格：
50管/48样|25管/24样
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒可测各种动物血清（浆）、组织等样本中胰蛋白酶活性。
本试剂盒利用胰蛋白酶（trypsin）能催化水解底物精氨酸乙酯的酯链，使其在253nm处吸光度值升高，根据吸光度的变化可测各种动物血清（浆）、组织等样本中胰蛋白酶活性。
保存：2～8℃，有效期6个月。
胰蛋白酶底物应用液：
临用前将1支粉剂加入到1瓶稀释液中，充分溶解后，待用。底物应用液必须现配现用，2～8℃条件下24小时内有效。
一、血清(浆)样本
二、组织匀浆样本
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本试剂盒利用胰蛋白酶（trypsin）能催化水解底物精氨酸乙酯的酯链，使其在253nm处吸光度值升高，根据吸光度的变化可测各种动物血清（浆）、组织等样本中胰蛋白酶活性。
- 增高：大多数急性胰腺炎病人及慢性肾功能衰竭病人的胰蛋白酶明显增高，半数以上的胰腺癌及慢性胰腺炎病人的胰蛋白酶也增高。但也有20％非胰性腹痛病人，特别是胆囊炎及十二指肠溃疡穿孔病人，胰蛋白酶也会增高。
- 降低：慢性胰腺炎，胆道疾病、慢性胆囊炎等。
- 快速简便：速率法，40分钟可完成50例左右样本的测定。
- 取样量微：取样量仅为50μL左右
- 稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。
- 再现性好：变异系数CV=1.7%。
- 回收试验：X =101%。
- 受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
- 测试面广：可测各种动物血清（浆）、组织等。
| 组分 | 50管/48样 | 25管/24样 | |
| 胰蛋白酶底物 | 粉剂 | 2支 | 3支 |
| 稀释液 | 2×30mL | 3×30mL | |
| 样本匀浆介质 | 60mL | 2×60mL | |
保存：2～8℃，有效期6个月。
胰蛋白酶底物应用液：
临用前将1支粉剂加入到1瓶稀释液中，充分溶解后，待用。底物应用液必须现配现用，2～8℃条件下24小时内有效。
一、血清(浆)样本
- 样本前处理：直接取血清(浆)进行测定。
- 操作表：
成分 空白管 测定管 胰蛋白酶底物应用液 1.5mL 1.5mL 37℃预温5分钟 样本 x mL 样本匀浆介质 x mL
样本与底物应用液混合的同时开始计时，混匀后，倒入0.5cm光径的石英比色皿中，于253nm处测定吸光度OD值，记下30秒时的吸光度OD值A1；将比色皿置于比色槽中不动，同时将比色槽温度恒定保持在37℃；如果比色槽无法恒温在37℃，可将比色皿中的反应液倒入预先编号的原试管中，放入37℃水浴箱中准确水浴20分钟，于20分30秒时记录吸光度OD值A2，计算ΔA＝A2－A1。
说明：- 在预试过程中，如果ΔA测定＜0.05，则将样本取样量或样本浓度相应加大后，再测进行测定。
- 在预试过程中，如果ΔA测定＞0.25，则将样本用样本匀浆介质稀释后，再测进行测定。
- 详细操作过程：
① 将紫外分光光度计于253nm处，0.5cm光径石英比色皿，用双蒸水调零。
注：石英比色皿准备两只，一只用于调零，一只用于测定。
② 将胰蛋白酶底物应用液37℃预温5分钟以上。
③ 往相应编号的试管中加入x mL的新鲜血清(浆)，吸取胰蛋白底物应用液 1.5mL冲入试管中，快速混匀，并计时。
注：空白管取样本匀浆介质x mL，吸取胰蛋白底物应用液 1.5mL冲入试管中，快速混匀，并计时，其他操作与测定管相同。
④ 迅速倒入石英比色皿中，紫外分光光度计，253nm处比色，30秒读取吸光度值A1。
⑤ 将此比色液倒入原试管中置于37℃水浴，准确计时20分钟，再迅速倒入石英比色皿中，20分30秒时读取吸光度值A2。
⑥ 求出两次吸光度差值ΔA＝A2－A1。
- 在预试过程中，如果ΔA测定＜0.05，则将样本取样量或样本浓度相应加大后，再测进行测定。
- 计算：
- 单位定义：在pH8.0，37℃条件下，每毫升血清(浆)中含有的胰蛋白酶每分钟使吸光度变化0.003即为一个酶活单位。
- 计算公式：
胰蛋白酶活性
(U/mL)＝ ΔA测定－ΔA空白 × V反总 × 1 ÷T 0.003 V样 V样
注：一般条件下，空白管吸光度稳定不变；
V反总：反应体系总体积，1.5＋x mL；
V样：样本取样量x mL；
T：反应时间，20min。 - 计算举例：
取胰腺炎病人的血浆50μL，按操作表进行测定，测得A1值为1.011，A2值为1.088，则ΔA测定＝0.077；测得空白A1值为0.721，空白A2值为0.721，则ΔA空白＝0，计算如下：胰蛋白酶活性
(U/mL)＝ 0.721－0 × 1.55 × 1 ÷20 0.003 0.05 0.05 ＝ 795.667U/mL
- 单位定义：在pH8.0，37℃条件下，每毫升血清(浆)中含有的胰蛋白酶每分钟使吸光度变化0.003即为一个酶活单位。
二、组织匀浆样本
- 样本前处理：
- 胰腺上清液制备：准确称取胰腺组织，按重量(g)∶体积(mL)＝1∶9的比例，加入9倍体积的匀浆介质，冰浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清待测。
- 小肠食糜及黏膜上清液的制备：取新鲜的小肠或完全解冻后的小肠，延肠壁纵向剪开，用小刀片刮下食糜及黏膜(整个操作过程放在冰箱保鲜薄膜上操作)。准确称取食糜及黏膜的重量，按照组织(g)∶样本匀浆介质(mL)＝1∶9的比例稀释，在冰浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清待测。上清液-20℃以下冷冻保存，15天内有效。
注：匀浆上清必须同时测定蛋白含量。 - 胰腺上清液制备：准确称取胰腺组织，按重量(g)∶体积(mL)＝1∶9的比例，加入9倍体积的匀浆介质，冰浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清待测。
- 操作表：
成分 空白管 测定管 胰蛋白酶底物应用液 1.5mL 1.5mL 37℃预温5分钟 样本 x mL 样本匀浆介质 x mL
样本与底物应用液混合的同时开始计时，混匀后，倒入0.5cm光径的石英比色皿中，于253nm处测定吸光度OD值，记下30秒时的吸光度OD值A1；将比色皿置于比色槽中不动，同时将比色槽温度恒定保持在37℃；如果比色槽无法恒温在37℃，可将比色皿中的反应液倒入预先编号的原试管中，放入37℃水浴箱中准确水浴20分钟，于20分30秒时记录吸光度OD值A2，计算ΔA＝A2－A1。
说明：- 在预试过程中，如果ΔA测定＜0.05，则将样本取样量或样本浓度相应加大后，再测进行测定。
- 在预试过程中，如果ΔA测定＞0.25，则将样本用样本匀浆介质稀释后，再测进行测定。
- 详细操作过程：
① 将紫外分光光度计于253nm处，0.5cm光径石英比色皿，用双蒸水调零。
注：石英比色皿准备两只，一只用于调零，一只用于测定。
② 将胰蛋白酶底物应用液37℃预温5分钟以上。
③ 往相应编号的试管中加入x mL的新鲜血清(浆)，吸取胰蛋白底物应用液 1.5mL冲入试管中，快速混匀，并计时。
注：空白管取样本匀浆介质x mL，吸取胰蛋白底物应用液 1.5mL冲入试管中，快速混匀，并计时，其他操作与测定管相同。
④ 迅速倒入石英比色皿中，紫外分光光度计，253nm处比色，30秒读取吸光度值A1。
⑤ 将此比色液倒入原试管中置于37℃水浴，准确计时20分钟，再迅速倒入石英比色皿中，20分30秒时读取吸光度值A2。
⑥ 求出两次吸光度差值ΔA＝A2－A1。
- 在预试过程中，如果ΔA测定＜0.05，则将样本取样量或样本浓度相应加大后，再测进行测定。
- 计算：
- 单位定义：在pH8.0，37℃条件下，每毫克蛋白中含有的胰蛋白酶每分钟使吸光度变化0.003即为一个酶活单位。
- 计算公式：
胰蛋白酶活性
(U/mgprot)＝ ΔA测定－ΔA空白 × V反总 ÷T÷(Cpr×V样) 0.003 V样
注：一般条件下，空白管吸光度稳定不变；
V反总：反应体系总体积，1.5＋x mL；
V样：样本取样量x mL；
T：反应时间，20min。
Cpr：匀浆液样本蛋白浓度，mgprot/mL(prot是指蛋白)。 - 计算举例：
例1．取新鲜鲫鱼肠粘膜，用样本匀浆介质制备成10%的黏膜匀浆，取15μL按照操作表进行测定，测得A1值为0.921，A2值为1.051，则ΔA测定＝0.130；测得空白A1值为0.721，空白A2值为721，则ΔA空白＝0，同时测得10%匀浆的蛋白浓度是8.18mg/mL，计算如下：胰蛋白酶活性
(U/mgprot)＝ 0.130－0 × 1.515 ÷20÷(8.18×0.015) 0.003 0.015 ＝ 1783.483U/mgprot
例2．取新鲜小鼠胰脏，用样本匀浆介质制备成10%的黏膜匀浆，取50μL按照操作表进行测定，测得A1值为1.103，A2值为1.166，则ΔA测定＝0.063；测得空白A1值为0.721，空白A2值为0.721，则ΔA空白＝0，同时测得10%匀浆的蛋白浓度是7.34mg/mL，计算如下：胰蛋白酶活性
(U/mgprot)＝ 0.063－0 × 1.55 ÷20÷(7.34×0.05) 0.003 0.05 ＝ 88.69U/mgprot
- 单位定义：在pH8.0，37℃条件下，每毫克蛋白中含有的胰蛋白酶每分钟使吸光度变化0.003即为一个酶活单位。
相关搜索：胰蛋白酶测定试剂盒(紫外比色法)，胰蛋白酶，Trypsin assay kit